三酰甘油氧化聚合物的檢測、評價及應用

三酰甘油氧化聚合物（Oxidized triacylglycerol polymers，TGP）是油脂氧化過程中產生的一類極其復雜的深度氧化產物，在油脂的加工、儲藏、使用過程中TGP總量持續遞增，經再次常規精煉也不衰減，是一個可以客觀表征油脂氧化程度的內源性指標。針對目前油脂氧化指標存在的缺陷和高靈敏度TGP測定的標準技術缺失等問題，開展了TGP與油脂氧化關聯性及其在油脂質量評價中應用的相關研究，主要研究內容如下：

1、TGP的制備型快速柱層析-高效體積排阻色譜檢測方法研究。采用制備型快速柱層析-高效體積排阻色譜（PFC-HPSEC）技術，研究建立了一種適于檢測冷榨油和精煉食用植物油等低含量TGP（小于3%）油脂的檢測方法，用中壓Flash柱預分離油脂極性組分，經高效體積排阻色譜細分TGO、TGD、ox-TG、DG、FFA等組分，用聚苯乙烯標準相對分子量定性，根據重量法測定油脂極性組分含量及高效體積排阻色譜面積歸一法定量油脂中TGO和氧化三酰甘油二聚物（TGD）百分含量，結果表明：TGO和TGD2分別在28-1800mg/L、11-2800mg/L范圍內線性關系良好，相關系數（R）均高于0.99，TGO及TGD的低檢測限分別為28mg/L、11mg/L，定量下限分別為113mg/L、44mg/L；相當于油脂中TGP的低檢測限為0.01%(100μg/g)。制備型快速柱層析的3個極性組分加標水平的平均回收率為95%-98%。制備型快速柱層析-高效體積排阻色譜檢測油脂TGP的重復性RSD均小于10%。制備型快速柱層析-高效體積排阻色譜方法與經典的硅膠柱-高效體積排阻色譜方法在定量油脂TGP的相對誤差低于8.9%。

2、TGP與油脂氧化程度關聯性研究。采用高效體積排阻色譜（HPSEC）技術，對食用植物油室溫儲藏氧化、Schaal烘箱法加速氧化、高溫煎炸氧化等三種油脂氧化過程中產生的極性組分（PCs）及其細分組分進行了比較分析，同時監測了油脂氧化過程中內源性天然抗氧化劑VE的含量變化，建立TGP與油脂氧化程度關聯性，結果表明：氧化三酰甘油（ox-TG）的量與誘導期呈現良好的線性關系。氧化三酰甘油寡聚物（TGO）的出現及內源性天然抗氧化劑VE的耗盡標志誘導期結束的。TGO基本都是氧化三酰甘油的三聚體，推測主要是含環氧基、酮基、醛基、C-C鍵橋、C-O-C鍵橋的甘油酯。ln(TGO/TGO0)與大豆油氧化程度成線性關系。

3、TGP的凝膠滲透色譜色譜制備與穩定性研究。采用制備型快速柱層析聯用高壓凝膠滲透色譜技術，從油脂極性組分制備mg量級TGO和TGD，考察了TGP的二聚體和寡聚體在多種物理狀態與儲藏條件下的穩定性，用高效體積排阻色譜測定了極性組分各相關組分的分子量，結果表明：高壓凝膠滲透色譜制備TGP的優化條件為：采用三級串聯凝膠滲透色譜柱規格Waters UltrastyragelTMLinear四氫呋喃柱（19mm×300mm）+Waters UltrastyragelTM500四氫呋喃柱（19mm×300mm）+Waters UltrastyragelTM100四氫呋喃柱（19mm×300mm），上樣量500ul，流動相四氫呋喃，流速4.2mL/min，TGO、TGD的收集時間分別為29.00-32.10min、32.25-33.50min。以油脂極性組分為原料的高壓凝膠滲透色譜制備TGP周期約為1h，單次分別獲得0.49mgTGD與0.23mgTGO，純度均在99%以上，TGD與TGO得率分別為29%和13%。TGD與TGO的凝膠滲透色譜制品適宜在四氫呋喃溶液穩定儲藏，-20℃至20℃各溫度條件下60d大衰減均低于3%，TGP固體即使-20℃保存60d也衰減10%，在25℃室溫下使用不應超過6h。極性組分中TGO、TGD、ox-TG、DG的分子量（Mw）分別為2469、1728、908、510，TGO以三聚體為主。

4、TGP的細胞毒性評價。研究了不同TGP濃度對巨噬細胞Ana-1的作用，采用倒置相差鏡觀察細胞生長，噻唑藍（MTT）法檢測細胞增殖能力，激光共聚焦鏡觀測細胞凋亡，酶標定量胞外乳酸脫氫酶，流式細胞術檢測胞內活性氧（ROS），結果表明：50μg/mL濃度的TGP致細胞明顯損傷，該濃度下的巨噬細胞在倒置相差顯微鏡下存活率明顯下降、增殖能力受到顯著抑制、吞噬中性紅的能力顯著降低、乳酸脫氫酶釋放量顯著上升，細胞早期凋亡明顯?；钚匝踹^度產生是TGP致細胞損傷的主要原因之一。TGD與TGO細胞毒性差異不明顯，支持Billek的油脂TGP低吸收率的結論，尚不能確定與惡性腫瘤相關性。

5、基于TGP的油脂質量評價應用。開展了基于TGP的地溝油檢測、冷榨油鑒別和煎炸油質量控制、毛油質量評價等應用研究。比較分析食用植物油與地溝油兩大樣本庫的TGP，結論如下：12種常見食用植物油41個樣本TGP含量0.69±0.41，3類典型地溝油64個樣本TGP含量6.01±3.44，差異極其顯著，據此可以一定程度準確鑒別地溝油；冷榨油具低TGP特征可顯著區別于精煉油；煎炸油中TGP與PCs線性相關，TGP直接指示煎炸油質量；毛油的TGP反映其新鮮程度。TGP在油脂質量評價中的應用優勢，依賴于分類油脂的TGP基礎數據庫。